réaction de Western-Blot

Cet article est extrait de l'ouvrage « Larousse Médical ».

Technique permettant de rechercher dans le sérum sanguin des protéines antigéniques - particulièrement des protéines virales - ou des anticorps dirigés contre ces protéines.

La réaction de Western-Blot est à présent très utilisée pour confirmer ou infirmer le résultat, parfois faussement positif, du test ELISA (test de recherche d'anticorps spécifiques) du V.I.H., virus du sida.

Technique

La réaction de Western-Blot se déroule en trois étapes.

La première étape consiste à dérouler chimiquement et à isoler les protéines du sérum sanguin grâce à une électrophorèse (déplacement de particules sous l'effet d'un champ électrique) réalisée sur un support chimique, le gel de polyacrylamide ; les protéines migrent alors d'autant plus loin que leur poids moléculaire est faible.

La deuxième étape consiste à transférer les protéines, séparées les unes des autres, du gel de polyacrylamide sur une membrane de nitrocellulose, support solide ayant la propriété d'accrocher les protéines de façon non spécifique.

La troisième étape est celle de la mise en évidence des protéines : on dépose des anticorps préalablement conjugués à une enzyme ou radiomarqués sur la membrane de nitrocellulose ; ceux-ci se fixent alors sur les protéines et sont visualisés après réaction enzymatique colorée ou par autoradiographie (technique de révélation de la radioactivité). En l'absence de protéines antigéniques spécifiques des anticorps testés (résultat négatif), les anticorps, non fixés, ne peuvent être visualisés.

Lorsque l'on recherche des anticorps viraux, par exemple dans le cas de l'infection par le V.I.H., ou pour diagnostiquer une maladie auto-immune, les deux premières étapes sont effectuées avec des protéines virales ou des cellules cultivées en laboratoire. Lors de la troisième étape, on dépose le sérum du malade sur la membrane de nitrocellulose, les anticorps que celui-ci est susceptible de contenir se fixant alors sur les protéines antigéniques. Pour mettre en évidence cette fixation, et donc la présence des anticorps, on utilise d'autres anticorps, préalablement marqués et qui ont la propriété de reconnaître les anticorps humains en produisant une réaction colorée.